Esej ABTS
Jedná se o analytickou metodu, která využívá spektrofotometrické měření ke stanovení antioxidační kapacity vzorku. Pomocí UV-Vis spektrofotometru se měří absorbance roztoku obsahujícího radikál ABTS • +, který je generován oxidací ABST (2, 2'-azinobis (3-ethylbenzothiazolin-6-sulfonát), bezbarvé látky ve formě. radikály jsou zbarveny absorbováním na vlnových délkách ve viditelném rozsahu. Přídavek k roztoku ABTS • + antioxidačních molekul, které mohou působit přenosem vodíku a elektronu, určuje redukci radikálu na bezbarvou formu, s následným zabarvením reakční směsi. Toto bělení, úměrné množství přítomného antioxidantu, může být měřeno jako snížení absorbance v průběhu určitého času při specifické vlnové délce (734 nm). hodnoty absorbance naměřené pro známá množství antioxidační molekuly vybrané jako referenční standard, kterým je obvykle kyselina askorbová nebo Trolox (v tomto případě hovoříme o antioxidační aktivitě TEAC Trolox Equivalent Antioxidant Capacity.
Antioxidační měření výkonu založené na použití ABTS má tu výhodu, že je jednoduché a rychlé. Navíc umožňuje měření antioxidačních látek jak hydrofilních, tak lipofilních v širokém rozmezí pH. Je však třeba mít na paměti, že použitý radikál (ABTS • +) není fyziologický a není přítomen v biologických systémech a že jsou často zdůrazňovány problémy opakovatelnosti měření v důsledku kinetiky reakcí různých použitých antioxidantů.
FRAP (Ferric Reduction Antioxidant Power)
Test FRAP měří redukční schopnost antioxidantů proti iontům železa. Jedná se o metodu založenou na přenosu elektronů, ve které ionty železa přecházejí z Fe3 + na Fe2 +. Za určitých podmínek pH (3, 6) a za přítomnosti TPTZ (2, 4, 6-tris (2-pyridyl) -s-triazinu) tvoří tyto ionty komplexy s různými vlastnostmi, zejména redukovaným derivátem (Fe2 + -TTPZ) má modrou barvu, která má maximální absorpci při 593 nm, kterou lze měřit spektrofotometricky. Redukční schopnost antioxidační látky může být proto měřena jako změna absorbance roztoku obsahujícího okysličovadlo na vlnovou délku stanovenou ve srovnání se změnou vzhledem ke standardu (např. Kyselina askorbová).
Test FRAP byl navržen tak, aby měřil redukční sílu plazmy, ale pak byl upraven pro testování antioxidační kapacity čistých sloučenin a komplexních matric. Vzhledem k tomu, že tato metoda umožňuje vyhodnotit pouze redukční kapacitu elektronovým přenosem, zcela ignoruje působení antioxidantů působících přenosem vodíku, neumožňuje měřit příspěvek molekul, jako jsou thioly a proteiny, které hrají antioxidační roli. v biologických tekutinách (např. krev). Výhodou při použití tohoto způsobu je to, že je to jedna z nejjednodušších, nejrychlejších a nejméně nákladných metod pro stanovení antioxidační kapacity in vitro.
DPPH TEST
2, 2-difenyl-1-pikrilhydrazyl (DPPH) je velmi stabilní a komerčně dostupný dusíkový radikál, charakterizovaný intenzivní purpurově červenou barvou, která ztmavne, když je redukována v přítomnosti molekuly s antioxidační kapacitou. Spektrofotometrickým měřením změny absorbance roztoku DPPH po reakci s antioxidační sloučeninou při 517 nm je možné kvantifikovat redukční kapacitu zkoušené látky, ať už působí s přenosem vodíku nebo přenosem elektronů. Výsledek je obecně vyjádřen jako IC50, tj. Množství antioxidantu schopného snížit počáteční koncentraci DPPH o 50%.
Jedná se o rychlý, jednoduchý a levný způsob. Limity této analytické techniky jsou dány možností, že výsledky analýzy jsou zkreslené v případě, kdy molekuly, které jsou předmětem zkoumání, absorbují ve stejném rozsahu vlnových délek radikálu DPPH nebo v přítomnosti velkých molekul, které jsou stericky nesouvislé. reagují s reaktivní částí radikálu. To způsobuje, že DPPH reaguje s antioxidanty až 1000 krát pomaleji než peroxylové radikály.
Test PCL (fotochemiluminiscence)
Test PCL je založen na reakci specifického radikálového druhu, superoxidového aniontu (O2 • -), vytvořeného fotochemicky UV zářením, se sloučeninou schopnou emitovat chemiluminiscenci. Použitým markerem je luminol, molekula, která při oxidaci volnými radikály emituje světlo, které lze měřit pomocí speciálního nástroje (Photochem®). Přítomnost antioxidačních látek v dávkové směsi deaktivuje radikální druhy inhibující emise chemiluminiscence. PCL analýza je velmi rychlá a citlivá. Kromě toho, s použitím dvou různých analytických protokolů, nazývaných ACW (Antioxidant Capacity ve vodě rozpustných) a ACL (Antioxidant Capacity Lipid rozpustný), mohou být měřeny příspěvky k celkové antioxidační kapacitě ve vodě rozpustné složky (flavonoidy, vitamín E) pro stejnou sloučeninu. C, aminokyseliny atd.) Než liposol rozpustný (tokoferoly, tokotrienoly, karotenoidy atd.). Antioxidační kapacita zkoušeného produktu se získá porovnáním hodnot zaznamenaných s měřeními standardních referenčních molekul, kyseliny askorbové pro protokol ACL a Trolox pro protokol ACW.
