všeobecnost
Imunofixace je laboratorní test, který umožňuje identifikaci a typizaci gama globulinů přítomných v biologickém vzorku.
Podrobně analýza umožňuje studovat - v pacientově krvi nebo moči - třídy imunoglobulinů (IgA, IgG, IgM, IgE nebo IgD) a typ lehkého řetězce kappa nebo lambda podle jejich specifické elektroforetické mobility, Následně pro identifikaci gama globulinu zahrnuje imunofixace inokulaci specifických antigenů pro fragment nebo odpovídající protilátku ( anti-imunoglobulinové antiséra ): přítomnost podezření na změnu je potvrzena tvorbou. sraženiny, viditelné pouhým okem nebo mikroskopem.
Tyto informace mají velký význam zejména pro stanovení diagnózy patologií plazmatických buněk (gamapatie nebo dyskrázie plazmatických buněk). Imunofixace je velmi užitečná pro hodnocení a monitorování mnohočetného myelomu, Waldenströmovy makroglobulinémie a primární amyloidózy (také nazývané amyloidóza lehkého řetězce).
co
Imunofixace (nebo imunoelektroforéza, zkráceně zkratka IFE ) je technika schopná určit, zda a která třída imunoglobulinů (IgG, IgM, IgA, IgD, IgE) nebo typu lehkého řetězce kappa nebo lambda je přítomna v nadměrné nebo vady krevního séra pacienta a moči.
Lehké řetězce kappa a lambda charakterizují monoklonální složku, tj. Protilátky se stejnou identickou chemickou strukturou.
Imunofixace séra a moči: kdy je to indikováno?
Plasmacelulární dysplazie nebo gamapatie jsou heterogenní skupinou poruch neznámé etiologie charakterizované:
- Neproporcionální proliferace klonu B buněk ;
- Přítomnost imunoglobulinu (nebo jeho polypeptidové podjednotky) v séru a / nebo moči, strukturně a elektroforeticky homogenní ( monoklonální ).
Normálně jsou dyscrasias plazmatické buňky diagnostikovány pomocí elektroforézy proteinů v séru a moči, následované imunofixací v séru (IFE).
Současně může být předepsán krevní test pro měření celkové koncentrace imunoglobulinů (IgG + IgM + IgA).
Více informací: Imunoglobuliny - co jsou, jak jsou měřeny a referenční hodnoty »Imunofixace: základní princip
Imunofixace je vyšetření, které zahrnuje dvě fáze (nejprve elektroforézu na agarózovém gelu, pak imunoprecipitaci se specifickými antiséry ).
První krok imunofixace je stejný jako u ELEKTROFORÉZY proteinů (nebo protidogramma), proto je třeba si pamatovat některé koncepty:
- Elektroforéza je laboratorní analýza, která umožňuje stanovit množství proteinů přítomných v krevním séru nebo v jiných biologických vzorcích a pro každou frakci odhalí, zda existují nějaké anomálie z hlediska kvality. Tato zkouška umožňuje separaci proteinů do pěti skupin: albumin, alfa 1 globulin, alfa 2 globulin, beta globulin a gama globulin ; ty jsou podrobněji zkoumány imunofixací.
- Elektroforéza je separační metoda založená na různých rychlostech migrace elektricky nabitých částic, přes roztok a inertní nosné médium, pod vlivem elektrického pole, generovaného stejnosměrným proudem. Zkouška využívá v praxi elektrický náboj a molekulovou hmotnost proteinů přítomných ve vzorku pacienta. Pod impulsem elektrického pole tyto makromolekuly migrují a „seskupují“ podle typu a reagují na stres charakteristickým způsobem. Výsledek ( elektroforetické sledování ) se skládá z různých píků a křivek, kterým odpovídají proteinové frakce. Obvykle je první vrchol, vyšší a užší, vrchol albuminu ; následovat, pozorujeme vrcholy globulinu, mnohem nižší než albumin. Zvýšení nebo snížení amplitudy a intenzity píků, které se tvoří v dráze, indikují větší nebo menší přítomnost proteinů v každé kategorii; čím více proteinů je přítomno v pásu, tím vyšší je příslušný pík. V případě gama globulinů, pokud chceme znát množství každé z různých tříd (IgA, IgM, IgG atd.), Bude nutné uchýlit se k jednorázové dávce. Obecně platí, že čím více gama globulinů je přítomno v pásmu, tím vyšší je příslušný pík; výška odpovídá celkovému množství bílkovin náležejících do určité kategorie.
IMMUNOFISSATION poskytuje:
1) Elektroforéza na agarózovém gelu : vzorek pacienta (sérum nebo moč) je uložen na elektroforetickém proužku, tj. Na podporu migrace (obvykle agarózový gel). Použitím elektrického pole, generovaného stejnosměrným proudem, se získá separace v různých pásmech. V praxi migruje každý typ gama globulinu ve směsi (tj. Ve vzorku pacienta) na základě molekulové hmotnosti a elektrického náboje. Různá elektroforetická pohyblivost gama globulinů umožňuje jejich identifikaci (každý z nich se shoduje se specifickým pásmem v elektroforetické cestě) a pozoruje případné anomálie.
2) Imunoprecipitace se specifickým antisérem (fixace) : ke každému elektroforetickému proužku (anti-IgG, anti-IgA, anti-IgM, anti-light kappa nebo anti-chain) se jednotlivě přidávají specifické antigeny pro specifickou protilátku nebo fragment. lambda lehký řetězec). Pokud je přítomen monoklonální protein, interakce antigenu s odpovídající protilátkou vytvoří úzký pás (to znamená, že výsledek je pozitivní) a vytvoření sraženiny, viditelné pouhým okem nebo mikroskopem. Nakonec je vzorek zpracován (tj. Promyt a zbarven), aby se odstranily proteiny, které nebyly vysráženy, aby se dosáhlo vysušení gelu a pokračovalo se ve čtení výsledků.
Proč to běží
Pro co je imunofixace?
Sérová imunofixace je zkouška určená k diagnostice nebo monitorování onemocnění charakterizovaných změnou gama globulinů, zejména pokud jde o produkci monoklonální složky ( monoklonální gamapatie ).
Další informace: Monoklonální gamapatie - Co a co jsou »Imunofixace je užitečná v případech podezření na dyscrasia plazmatických buněk a je zásadní pro studium MIELOMY (a příbuzných patologií) a MGUS (zkratka pro "monoklonální gamapatie nejistého významu").
Tento test nám také umožňuje vyhodnotit Waldenströmovu makroglobulinemii a amyloidózu lehkého řetězce ( AL ).
Imunofixace: kdy je předepsáno vyšetření?
Indikace imunofixace je následována klinickým nebo laboratorním důkazem, který vyvolává podezření na změny monoklonálních protilátek nebo imunoglobulinů v séru nebo v moči.
Tato zkouška například umožňuje prohloubit výsledek séroprotektivní nebo urinární elektroforézy: když se v elektroforetickém sledování pruhy, které odpovídají gama globulinům, odchylují od normality, imunofixace identifikuje, který z těchto proteinů je změněn z hlediska množství. a kvality.
Souhrnně lze předepsat sérovou imunofixaci:
- V případě, že jiné laboratorní testy poskytují abnormální výsledek, pokud jde o nepřítomnost nebo menší a větší množství plazmatických proteinů s ohledem na normu;
- Pokud je podezření na přítomnost nemocí charakterizovaných produkcí monoklonální složky, jako jsou: \ t
- Mnohočetný myelom a jeho varianty;
- Waldenströmova makroglobulinémie;
- amyloidóza;
- Pokud se u pacienta objeví příznaky a příznaky, které naznačují přítomnost monoklonální gamapatie nebo mnohočetného myelomu, jako jsou:
- Bolesti kostí;
- anémie;
- Snadná únava;
- Recidivující infekce;
- Nevysvětlitelné zlomeniny.
V případě mnohočetného myelomu mají elektroforéza proteinů a imunofixace značný význam také pro monitorování průběhu onemocnění (sledování).
Imunofixace: na které vzorky lze provést?
Biologické vzorky, které mohou být podrobeny imunofixaci, jsou hlavně:
- Sérum (imunofixace v séru);
- Moč (imunofixace moči);
- Tekutina * (kapalinová imunofixace).
Poznámka : CSF nebo cerebrospinální tekutina je tekutina, která proniká a chrání mozek, míchu, lebeční nervy a spinální kořeny.
Normální hodnoty
NEGATIVNÍ výsledek sérové a urinární imunofixace pro monoklonální nebo polyklonální gama globuliny je považován za NORMÁLNÍ .
Gama globuliny
Gama globuliny tvoří 9-20% celkových plazmatických proteinů.
- Referenční hodnota Gama globulin : 0, 9-1, 4 g / dl
Pokud jde o celkovou koncentraci imunoglobulinů ( IgG + IgM + IgA ), má se za to, že hodnoty mezi 600 a 2300 mg / dl jsou normální.
- Referenční hodnota Imunogobuliny v séru :
- IgA : 90-400 mg / dl
- IgG : 800-1800 mg / dl
- IgM : 60-280 mg / dl
- IgD : 0, 3-0, 4 mg / dl
- IgE : 20-440 mg / dl
Poznámka : referenční interval zkoušky se může mírně lišit v závislosti na věku, pohlaví a přístrojovém vybavení používaném v analytické laboratoři. Z tohoto důvodu je vhodnější konzultovat rozsahy uvedené přímo ve zprávě. Mělo by se také připomenout, že výsledky analýz musí být hodnoceny jako celek praktickým lékařem, který zná anamnézu pacienta.
Vysoké hodnoty - příčiny
Nárůst gama globulinů může být:
- Polyklonální, pokud je produkce imunoglobulinů heterogenní, to znamená, že všechny složky gama globulinu - produkované nebo odvozené z různých plazmatických buněk - jsou ovlivněny vzrůstem;
- Monoklonální, když jsou gama globuliny produkovány nebo odvozeny z jediného typu (klon) plazmatických buněk.
Zvýšení polyklonálních gama globulinů může být spojeno s:
- Chronická zánětlivá onemocnění;
- Revmatoidní artritida;
- Systémový lupus erythematosus;
- Chronická onemocnění jater (jako je hepatitida a cirhóza);
- Akutní a chronické infekce;
- Nedávné očkování;
- Některá nádorová onemocnění.
Vysoké hodnoty monoklonálního gama globulinu mohou místo toho indikovat přítomnost:
- Některé novotvary a chronické záněty;
- Mnohočetný myelom;
- lymfom;
- Waldenströmova makroglobulinémie.
Nadbytek gama globulinu se nazývá hypergamaglobulinémie, zatímco nedostatek je znám jako hypogamaglobulinémie .
Nízké hodnoty - příčiny
Redukce gama globulinů může indikovat přítomnost různých onemocnění imunitního systému na genetickém základě, včetně agamaglobulinémie nebo sekundární imunodeficience (např. AIDS, selhání ledvin, akutní sepse a Cushingův syndrom).
Snížení hodnot gama globulinu může také záviset na použití cytostatik, imunosupresiv a steroidů.
Jak se provádí
Sérová imunofixace
Sérová imunofixace zahrnuje jednoduchý odběr krve ze žíly paže. Sérum se získá centrifugací biologického vzorku; to ve skutečnosti umožňuje oddělit frakci obsahující buňky (korpuskulární část) od tekuté krve (plazmy). Krevní sérum neobsahuje koagulační faktory (fibrinogen, faktor VIII, faktor V a protrombin).
Imunofixace moči
Pro provedení imunofixace moči je nutné odebrat malé množství moči do speciální sterilní nádoby. Na základě údajů lékaře a laboratoře lze vzorek odebrat bez přesného načasování ( náhodně ) nebo do 24 hodin .
Imunofixace likéru
Analýza vyžaduje odebrání malého množství cerebrospinální tekutiny, vložením jehly do dutiny páteře ( lumbální punkce ).
příprava
Immunofixace: jak se připravujete na zkoušku?
- Před odběrem krve mohou některé laboratoře vyžadovat, abyste pozorovali rychlou dobu nejméně 10-12 hodin. Během této doby je povoleno malé množství vody.
- Imunofixace může být prováděna na moči odebrané v určitý den (náhodně) nebo během 24 hodin, takže je nutné předem získat vhodné sterilní nádoby.
- Co se týče imunofixace kapaliny, není nutná žádná zvláštní příprava.
Co může změnit výsledek zkoušky?
Některé léky mohou ovlivnit výsledek imunofixace, proto je vhodné informovat lékaře o probíhajících lécích.
V šesti měsících před vyšetřením může podávání vakcín (imunizace) a použití léků, jako je fenytoin, prokainamid, perorální kontraceptiva, metadon a terapeutický gama globulin, zvýšit koncentraci imunoglobulinů. Dalšími léky, které mohou změnit výsledek testu, jsou kortikosteroidy, neomycin, kyselina acetylsalicylová a chlorpromazin.
Interpretace výsledků
Výsledek imunofixace se vyhodnocuje v kombinaci s výsledky dalších analýz. Interpretace nálezu je odpovědností praktického lékaře nebo specialisty, který dokáže identifikovat a porovnat změny ovlivňující specifický gama globulin (např. Pás, který se shoduje s imunoglobuliny G) u některých onemocnění. Toto hodnocení potvrzuje nebo podporuje diagnostickou hypotézu: obecně může imunofixace odhalit normální profil gama globulinu nebo identifikovat monoklonální protein nebo polyklonální model .
Jakmile je nemoc definována, může být provedena imunofixace pro:
- Sledujte nemoc v průběhu času, pak sledujte její průběh (sledování);
- Zkontrolujte účinnost terapeutického protokolu .
Výhody a nevýhody imunofixace
Ve srovnání s proteinovou elektroforézou imunofixace:
- Je rychlejší : výsledky imunizace se obvykle získají do tří hodin;
- Je citlivější (i když mírně): imunofixace může odhalit imunoglobulin vyloučený z proteinové elektroforézy, zejména při nízkých koncentracích (méně než 1 gram / litr).
Dále imunofixace:
- Může být částečně automatizován ;
- Je snadno čitelný a interpretovatelný .
Imunofixace je však dražší než proteinová elektroforéza a umožňuje pouze analýzu gama globulinu .
Normální výsledek
V imunofixaci normální cesta zahrnuje:
- Pás, který se shoduje s tmavším imunoglobulinem G ( IgG );
- Pásmo odpovídající nejlehčímu imunoglobulinu A ( IgA );
- Absence pásu pro imunoglobulin M ( IgM );
- Pás kappa je hustší než pás lambda (lehký řetězec) s poměrem 2: 1.
V normálním výsledku jsou pásy velké a dochází k postupnému a rovnoměrnému snížení hustoty barev směrem k okrajům pásu imunoelektroforézy.
Polyklonální gama globuliny
V některých případech jsou všechny imunofixační pásy rovnoměrně zakryty ve stejném rozsahu. Tento model představuje přítomnost polyklonálních imunoglobulinů . Také v tomto případě jsou pásy široké a přechod na hrany imunoelektroforetického proužku je postupný. Pásmo IgM - obvykle chybí - je široké.
Monoklonální gamma globiny
Pokud lze v cestě imunofixace identifikovat úzký pás s ostrými hranami, znamená to, že hledání monoklonálních složek je pozitivní .
Identifikace monoklonálního imunoglobulinu je užitečná při diagnostice následujících stavů:
- Monoklonální gamapatie nedeterminovaného významu (MGUS);
- Mnohočetný myelom;
- Waldenstromova makroglobulinémie;
- Amyloidóza.
Imunofixace může být dále použita k monitorování terapie v dyskrazii plazmatických buněk (tj. Mnohočetný myelom a Waldenstromova makroglobulinémie). Pokud hladina monoklonálního proteinu po chemoterapii klesá nebo není detekovatelná, může to znamenat odpověď na léčbu . Naopak monoklonální protein přetrvávající navzdory léčbě je známkou refrakterního onemocnění .
Vezměte prosím na vědomí . Negativní výsledek imunofixace vždy nevylučuje dyscrasia plazmatických buněk. Například nesekreční mnohočetný myelom nebo oligosekretorii může poskytnout negativní výsledky jak v moči, tak v séru. Pokud je tedy diagnostické podezření na gamapatii stále vysoké, je stanoveno stanovení poměru lehkých řetězců Kappa / Lambda Libere ( poměr K / L ).
Imunofixace a diagnostika roztroušené sklerózy
Imunofixace mozkomíšního moku ( likvoru ) je předepsána, pokud má lékař podezření na roztroušenou sklerózu . V tomto případě je určovaná dráha charakteristická, protože zdůrazňuje přítomnost tzv. Oligoklonálních pásem . Výsledek je uveden v laboratorní zprávě jako pozitivní . Je třeba vzít v úvahu, že pásy nejsou normálně pozorovány při sérové imunofixaci, protože korelují s produkcí intratekálního gama globulinu .
Je však třeba poznamenat, že tento nález nutně nepotvrzuje diagnózu, protože s oligoklonálními proužky v mozkomíšním moku se mohou vyskytnout i jiné stavy.
Jinými slovy, identifikace oligoklonálních pásů s imunofixací likérů je velmi užitečná pro podporu diagnózy roztroušené sklerózy, ale musí být potvrzena dalšími vyšetřováními . Dalšími podmínkami, které mohou poskytnout tento výsledek, jsou záněty centrální nervové soustavy, mezi které patří: encefalitida související s HIV, neurosyfilis, neurosarkoidóza, lymská meningoencefalitida, malignity CNS, optická neuromyelitida a transverzní myelitida.
